干法裝柱與濕法裝柱剛好相反的是,它是將干燥的吸附劑從柱子上端直接加入到一個(gè)空的柱子中,然后用油泵抽柱子底部,相當(dāng)于減壓過柱,直到柱子變得很結(jié)實(shí),再用淋洗劑“走柱子”。干法裝柱的一個(gè)缺點(diǎn)就是在裝入洗脫劑后,由于溶劑和固定相之間的吸附放熱,所以柱子容易變花,影響分離效果。解決的方法是:(1)固定相一定要添加結(jié)實(shí);(2)一定要用較多的溶劑“走柱子”,直到柱子的下端不再發(fā)燙,恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。無論使用哪種方法裝柱,都要求所裝的柱子結(jié)實(shí)、勻稱、無氣泡。需要了解更多層析柱知識,歡迎咨詢江陰源景智能科技有限公司。源景智能科技的層析柱,以先進(jìn)技術(shù)保障分離效果。蕪湖中小試玻璃層析柱圖片
層析柱的裝柱非常重要,裝柱的效果會(huì)直接影響層析分離效果。有濕法裝柱和干法裝柱等兩種方法。濕法裝柱很簡單,使用也普遍,就是先用比固定相多一倍的洗脫劑將固定相活成勻漿,柱子底部先用脫脂棉塞緊,然后倒入洗脫劑將脫脂棉中氣泡趕出。用漏斗將活好的固定相倒入柱子中,打開底部活塞,將柱子中高出固定相的溶劑放出。期間不斷用橡皮棒敲打,將固定相敲實(shí),做到密實(shí)均勻無氣泡即可。很多時(shí)候用加壓的方法可以很高效地裝好柱子,而且在柱子中沒有氣泡產(chǎn)生。干法裝柱與濕法裝柱剛好相反的是,它是將干燥的吸附劑從柱子上端直接加入到一個(gè)空的柱子中,然后用油泵抽柱子底部,相當(dāng)于減壓過柱,直到柱子變得很結(jié)實(shí),再用淋洗劑“走柱子湖州工業(yè)生產(chǎn)化PP聚丙烯層析柱江陰源景智能科技層析柱,讓復(fù)雜成分分離變得簡單。
在進(jìn)行分離時(shí),首先將樣品溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?,然后通過注射器將樣品注入中壓層析柱。樣品經(jīng)過填充材料時(shí),其中的不同組分在與填充材料固定相的相互作用下,以不同的速率通過柱子。這樣,在一定時(shí)間內(nèi),不同組分會(huì)分散在柱子中的不同位置上。為了改變樣品分離的速度和選擇性,還可以改變流動(dòng)相的組成或流速。此外,中壓層析柱通常還配備了檢測器,如紫外可見光檢測器或熒光檢測器,用于檢測樣品組分的信號強(qiáng)度和濃度。中壓層析柱具有一些明顯的優(yōu)點(diǎn):1.更高的分離效率和更低的分析成本:中壓層析柱相對于制備層析柱而言,具有更高的分離效率和更低的分析成本,因此可以用于處理大批量的樣品。
親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析柱一般很短,通常10cm左右。上樣時(shí)應(yīng)注意選擇適當(dāng)?shù)臈l件,包括上樣流速、緩沖液種類、pH、離子強(qiáng)度、溫度等,以使待分離的物質(zhì)能夠充分結(jié)合在親和吸附劑上。一般生物大分子和配體之間達(dá)到平衡的速度很慢,所以樣品液的濃度不易過高,上樣時(shí)流速應(yīng)比較慢,以保證樣品和親和吸附劑有充分的接觸時(shí)間進(jìn)行吸附。生物分子間的親和力是受溫度影響的,通常親和力隨溫度的升高而下降。所以在上樣時(shí)可以選擇適當(dāng)較低的溫度,使待分離的物質(zhì)與配體有較大的親和力,能夠充分的結(jié)合;而在后面的洗脫過程可以選擇適當(dāng)較高的溫度,使待分離的物質(zhì)與配體的親和力下降,以便于將待分離的物質(zhì)從配體上洗脫下來。層析柱配套工藝優(yōu)化服務(wù),提升收率!
上樣后用平衡洗脫液洗去未吸附在親和吸附劑上的雜質(zhì)。平衡緩沖液的流速可以快一些,但如果待分離物質(zhì)與配體結(jié)合較弱,平衡緩沖液的流速還是較慢為宜。如果存在較強(qiáng)的非特異性吸附,可以用適當(dāng)較高離子強(qiáng)度的平衡緩沖液進(jìn)行洗滌,但應(yīng)注意平衡緩沖液不應(yīng)對待分離物質(zhì)與配體的結(jié)合有明顯影響,以免將待分離物質(zhì)同時(shí)洗下。親和層析的另一個(gè)重要的步驟就是要選擇合適的條件使待分離物質(zhì)與配體分開而被洗脫出來。親和層析的洗脫方法可以分為兩種:特異性洗脫和非特異性洗脫。特異性洗脫是指利用洗脫液中的物質(zhì)與待分離物質(zhì)或與配體的親和特性而將待分離物質(zhì)從親和吸附劑上洗脫下來。源景智能科技的層析柱,助力您輕松應(yīng)對分離挑戰(zhàn)。合肥玻璃PP層析柱廠家電話
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層析柱(chromatographycolumn)是一種在層析技術(shù)中發(fā)揮關(guān)鍵作用的裝置,以下是關(guān)于層析柱的一些要點(diǎn):結(jié)構(gòu)組成方面:通常有柱體(常見的如玻璃管、有機(jī)玻璃管、不銹鋼管等材質(zhì))、上下端的密封部件(防止物質(zhì)泄漏)、內(nèi)部有起分離作用的固定相(如凝膠、硅膠、氧化鋁、離子交換樹脂等不同材料,填充在柱內(nèi))、有的還可能配備有分布器(使樣品和流動(dòng)相均勻分布進(jìn)入柱內(nèi))、濾網(wǎng)(支撐固定相)等。工作原理方面:基于混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相之間分配系數(shù)(或吸附、解吸、親和力、分子大小等其他特性)的差異而實(shí)現(xiàn)分離。當(dāng)流動(dòng)相(液體或氣體)攜帶樣品通過層析柱時(shí),由于不同成分與固定相的相互作用不同,在柱內(nèi)的遷移速度有差異,從而在柱內(nèi)形成不同的區(qū)帶,隨著流動(dòng)相不斷流過,各組分逐步在柱的不同位置流出,實(shí)現(xiàn)分離。蕪湖中小試玻璃層析柱圖片