外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷：近年來(lái)眾多文獻(xiàn)報(bào)道，肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)生的發(fā)展，是早期診斷肺病的有效途徑。有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽(yáng)性的占80%，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽(yáng)性的只占2%，因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物。Park等通過(guò)Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì)，進(jìn)一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號(hào)傳導(dǎo)途徑以促進(jìn)一些病癥的發(fā)生的發(fā)展，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物。近幾年來(lái)，市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。無(wú)錫外泌體提取試劑廠家

外泌體的提取方法，先用含無(wú)外泌體血清的培養(yǎng)基對(duì)人脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行饑餓培養(yǎng)，這樣可使干細(xì)胞處于正常生長(zhǎng)狀態(tài)，不會(huì)被克制生長(zhǎng)增殖，其所分泌的外泌體所包含的有效物質(zhì)也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體，然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進(jìn)行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細(xì)胞及其碎片，用100kd超濾管對(duì)低速差速離心后的離心液進(jìn)行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液，將超濾液經(jīng)過(guò)第三離心處理去除雜質(zhì)后直接用0.22μm過(guò)濾器過(guò)濾除菌，過(guò)濾掉粒徑為220nm以上的物質(zhì)，進(jìn)一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液，因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮，這樣過(guò)濾除菌效率得到較大提高，較后將濃縮液進(jìn)行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。濟(jì)南正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話外泌體提?。翰钏匐x心。差速離心仍然是較常見(jiàn)的外泌體分離技術(shù)之一。

1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會(huì)分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗一些病癥反應(yīng)。2007年HValadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過(guò)外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來(lái)越多，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、一些病癥生長(zhǎng)于侵襲等各種生物過(guò)程中。目前的主流觀點(diǎn)認(rèn)為，外泌體的產(chǎn)生過(guò)程為：細(xì)胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)體（endosome），再形成多泡體（multivesicularbodies，MVB），較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體較早見(jiàn)于1981年，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，并命名為exosome。對(duì)于外泌體的作用，當(dāng)時(shí)推測(cè)為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。

作為一種分子通斷開關(guān)的KRAS發(fā)生突變時(shí)會(huì)處于“開啟”狀態(tài)。在80%～95%的胰腺導(dǎo)管腺?。≒DAC）當(dāng)中，這個(gè)基因發(fā)生突變，這也是這種一些疾病中較為常見(jiàn)的突變。這些研究人員證實(shí)iExosome能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子，并且比他們的合成對(duì)應(yīng)物脂質(zhì)體（liposome）更加高效。脂質(zhì)體不具有外泌體表現(xiàn)出的天然復(fù)雜性和優(yōu)勢(shì)。德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)助理教授ValerieLeBleu博士說(shuō)，“我們的研究提示著與脂質(zhì)體相比，外泌體表現(xiàn)出運(yùn)送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長(zhǎng)的優(yōu)異能力。我們也證實(shí)外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來(lái)自循環(huán)單核細(xì)胞的吞噬作用。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。

外泌體（exosome），特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?，F(xiàn)已證實(shí)可以分泌外泌體的細(xì)胞有：肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、瘤細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時(shí)，不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來(lái)完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。濟(jì)南正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話

也可以作為治病手段，未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。無(wú)錫外泌體提取試劑廠家

外泌體在肺病治病中的作用：有研究發(fā)現(xiàn)，使用外泌體運(yùn)載紫杉醇（PTX）可顯著提高病細(xì)胞對(duì)PTX的吸收，將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細(xì)胞毒性，Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展。Aqil等在進(jìn)行裸鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，加載至外泌體中的雷公藤紅素（Exo-CEL）比普通的CEL有更強(qiáng)的抗一些病癥功效，且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性，由此可以證明，外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性。到目前為止，外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制，有效的外泌體藥物遞送平臺(tái)的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在治病靶點(diǎn)的探索。已有的研究表明外泌體在肺病治病領(lǐng)域有著廣闊的前景，期待外泌體在肺病治病領(lǐng)域早日得到突破，造福更多的患者。無(wú)錫外泌體提取試劑廠家