密度過高會讓細胞沒有足夠的生存空間，密度過低會讓細胞無法互相連接健康生長。建議大家在細胞接種前，一定要調(diào)整好適合細胞生長的濃度，提高細胞的存活率。溫度控制不達標慢凍快融是細胞凍存復蘇的關(guān)鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中，都會要求嚴格的梯度降溫，常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮，一定要避免溫度原因?qū)е录毎匀?；除非使用了成分?jīng)過優(yōu)化、經(jīng)過嚴格測試的凍存液，才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟。保存的時候也要保證整個細胞都是處于液氮的液面下方，避免溫度對細胞存活的影響。無血清凍存液使用方法：將加有凍存液的細胞懸液分裝至凍存管中。廈門天津無血清細胞凍存液

細胞凍存秘籍：細胞凍存對于大多數(shù)動物細胞，通常每分鐘下降-1至-3℃。控制冷卻過程的較好方法是使用程序降溫系統(tǒng)。如果沒有程序降溫系統(tǒng)，可以使用程序降溫盒，然后將其置于-70℃至-90℃冰箱中過夜。雖然這種方法適用于許多細胞系，但不能提供可控的，均勻的或可重復的冷卻，不建議用于珍貴細胞。無論使用哪種冷卻方法，重要的是快速高效地將其傳輸?shù)捷^終存儲位置。如果轉(zhuǎn)移不能立即完成，可以將小瓶置于干冰上一段時間。這樣可以避免在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生溫度升高而損害細胞。在這個轉(zhuǎn)移過程中溫度升高是解凍后影響細胞活力的主要原因。上海正規(guī)無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能：既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存，也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。

細胞冷凍的原理：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。

細胞凍存：取出凍存管，注明細胞名稱，代數(shù)，日期。離心后，以無菌吸管吸棄上清，不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻，根據(jù)計數(shù)結(jié)果，將細胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴密封口后，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1℃?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中，然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置，可以先將凍存管置于4℃30min，再-20℃凍存1h直至完全冷凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經(jīng)冷凍的細胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中，置于液氮上方的氣相空間中儲存1000 rmp離心5分鐘，去除離心管中的上清液，收集細胞沉淀。

無血清凍存液通用于各種動物細胞株（tumour細胞和常規(guī)細胞），凍存細胞可在-80℃長期保存（>5年）。配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分，提高細胞存活率和活力，亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。該產(chǎn)品添加了細胞沉降穩(wěn)定劑，可延緩細胞在凍存過程中的沉降速率，防止細胞互相擠壓，影響細胞凍存效果。另外，添加了細胞膜保護劑、滲透性細胞膜內(nèi)保護劑、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑，這些成分在溶液中同水分子結(jié)合，發(fā)生水合作用，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇存活率。該產(chǎn)品配方成分明確，不含血清、不含動物源性蛋白，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全；不光適用于常規(guī)細胞系、原代細胞，同時亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞。廈門天津無血清細胞凍存液

需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。廈門天津無血清細胞凍存液

以前在另一家實驗室的時候，凍存細胞根本就沒有講究這些標準操作。凍存的細胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細胞）、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細胞酶消化后直接參與離心，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0)，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中，較久保存，幾年后細胞的活力仍沒有什么受損，照常能復蘇，成活率高。但有三點須注意：（1）一是細胞的生長狀態(tài)要好，不能長得過稀，同樣也不能過密，細胞的狀態(tài)看起來相當健康。70%密度的要保存的細胞須再長24h才能全滿，萬一細胞狀態(tài)不好，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細胞的量要留心，不能太密也不能太稀，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時間不能過長，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細胞，半年還有30%~50%的細胞有活性，但一年的細胞就沒有活的。廈門天津無血清細胞凍存液