提取RNA的詳細(xì)步驟:首先,將研缽晾干夠,倒入1/3體積的液氮,加入0.2g均質(zhì)的植物材料,充分研磨后轉(zhuǎn)入一個(gè)含有300微升GMT的1.5ml的離心管中,搖勻。然后,加入30微升2mol/lNaAc進(jìn)行搖勻,加入300微升酸酚搖勻,加入100微升的氯仿?lián)u勻。然后,在四攝氏度12000r/min下離心二十分鐘,吸取上清液的3/4,加入等體積的異丙醇,于冰上放置十五分鐘。然后,在四攝氏度12000r/min下離心十分鐘,將沉淀懸浮于含100微升的4mol/lLiCl小試管中,于-20攝氏度下放置過(guò)夜。然后,在4攝氏度13000r/min下離心10-15min,將沉淀溶于0.4mlDEPC處理水中,加入1/2體積氯仿和1/2體積酸酚,搖勻,進(jìn)行抽提,在4攝氏度13000r/min下離心五分鐘。將上清液中加入等體積的氯仿?lián)u勻,進(jìn)行抽提,在四攝氏度13000r/min下離心五分鐘,上清液中加入1/10體積3mol/lNaAc和兩倍體積的午睡乙醇與-20攝氏度放置一小時(shí)。拭子RNA提取試劑的選擇?操作簡(jiǎn)便性。蘇州RNA提取試劑
RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1、RNA降解:可能是提取樣本本身降解,或者是在提取過(guò)程中導(dǎo)致的降級(jí);應(yīng)當(dāng)盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取,采集的樣本應(yīng)當(dāng)及時(shí)置于液氮或者-80℃冰箱凍存,并減少反復(fù)凍融。在RNA提取過(guò)程中應(yīng)當(dāng)使用RNase/DNasefree的吸頭、離心管及其他材料,提取過(guò)程盡可能的快,提取后的RNA應(yīng)置于冰盒上并及時(shí)放于-80凍存。如提取后的RNA需要進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè),則應(yīng)提取好后立刻進(jìn)行電泳,電泳緩沖液應(yīng)更換新配制的。2、鹽及有機(jī)溶劑殘留:提取試劑中含有酚及胍鹽,洗滌液中含有乙醇,在提取過(guò)程中裂解液吸棄不徹底,洗液沒(méi)有充分晾干導(dǎo)致的,殘留的鹽及有機(jī)溶劑對(duì)后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄和PCR均存在不同程度的壓制作用,因此在提取過(guò)程中應(yīng)充分去除組織裂解液,洗滌時(shí)應(yīng)充分,使管壁四周均能被洗滌到,另外管子空離和吹風(fēng)是必須的步驟,會(huì)進(jìn)一步降低有機(jī)物殘留。蘇州RNA提取試劑哪家好主要取決于離心柱對(duì)核酸的吸附能力。
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過(guò)程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開(kāi)發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級(jí)代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒特點(diǎn):操作簡(jiǎn)單快速,處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲(chóng)中的多糖污染。適用于各種昆蟲(chóng)組織,每100mg組織能提取到20~30μg總RNA。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。一站式,提供RNase-free的樣品收集管·
植物、動(dòng)物、人類都存在RNA干擾現(xiàn)象,這對(duì)于基因表達(dá)的管理、參與對(duì)病菌傳染的防護(hù)、控制活躍基因具有重要意義。RNA干擾是一個(gè)生物過(guò)程,在這個(gè)過(guò)程中雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。自1998年發(fā)現(xiàn)以來(lái),RNA干擾已經(jīng)作為一種強(qiáng)大的“基因沉默”技術(shù)而出現(xiàn)。RNA干擾作為研究基因運(yùn)行的一種研究方法已被普遍應(yīng)用于基礎(chǔ)科學(xué),它可能在將來(lái)產(chǎn)生更多更新的醫(yī)治方法??茖W(xué)家認(rèn)為,RNA干擾技術(shù)不僅是研究基因功能的一種強(qiáng)大工具,不久的未來(lái),這種技術(shù)也許能用來(lái)直接從源頭上讓致病基因“沉默”,以醫(yī)治病癥甚至一些病,在農(nóng)業(yè)上也將大有可為。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配。
動(dòng)物細(xì)胞RNA提?。?、懸浮細(xì)胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,用無(wú)菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來(lái),然后再加入裂解液進(jìn)行裂解。千萬(wàn)不要完全棄掉液體后,往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液,這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè),從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸,從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底,降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細(xì)胞吹下來(lái),轉(zhuǎn)移到無(wú)RNA酶的EP管中,加裂解液進(jìn)行提取。RNA提取試劑注意事項(xiàng):硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑。成都RNA提取試劑進(jìn)貨價(jià)
RNA提取試劑注意事項(xiàng):必須戴一次性手套操作。蘇州RNA提取試劑
科學(xué)家曾經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室里就成功地讓RNA實(shí)現(xiàn)了自我復(fù)制的功能。不僅如此,還有科學(xué)家構(gòu)建了一種DNA-RNA雜交基因組的大腸桿菌。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證明,即使有DNA-RNA的雜交鏈的中間態(tài),生物也不至于會(huì)死亡。所以,RNA較早可能給就是生物的遺傳物質(zhì),只是后來(lái)逐步被替代了。當(dāng)然,還有一些次要的原因,比如,我們都知道DNA是在細(xì)胞核當(dāng)中的,完成生命活動(dòng)這些步驟其實(shí)都在細(xì)胞核外進(jìn)行,因此這樣其實(shí)更加安全。而如果是RNA,那就沒(méi)有必要存在細(xì)胞核了,但是當(dāng)細(xì)胞損失時(shí),就很容易出現(xiàn)問(wèn)題。因此,DNA后來(lái)逐漸取代了RNA作為生物的遺傳物質(zhì)。但這并不是說(shuō)RNA不能夠作為遺傳物質(zhì),相反它是可以作為遺傳物質(zhì)而存在的。蘇州RNA提取試劑