鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。鼠尾膠原對前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用。北京鼠尾膠原廠家批發(fā)價

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中，倒入0.5mL自組裝液，室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進(jìn)行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL；滴加1mol/L的氯化氫，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉)，約16滴/min。金華正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠，模擬真實(shí)的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上，pH左右時可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積，混勻，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。制備鼠尾膠原（兩個同學(xué)一組操作）。南京鼠尾膠原

鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜。北京鼠尾膠原廠家批發(fā)價

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式，為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞，培養(yǎng)7天時進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻，平均厚度約為1mm；HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開；掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形，纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接；同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動頻率是相同的；同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立，為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛清理功能的影響提供了良好的方法和途徑。北京鼠尾膠原廠家批發(fā)價