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小鼠原代肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察本實驗在Seglen兩步灌流法的基礎(chǔ)上改進，平均每只小鼠肝臟可獲得3×107～5×107個細(xì)胞。臺盼藍染色結(jié)果顯示，即時分離的原代肝細(xì)胞活率可達到85%～90%。即時分離的原代肝細(xì)胞胞體呈圓形或類圓形，多為單核或雙核，細(xì)胞間邊界清晰(圖1A)。接種后的肝細(xì)胞4h開始貼壁，24h大部分肝細(xì)胞貼壁，細(xì)胞形態(tài)多呈多角形或不規(guī)則形，細(xì)胞核大而圓，可見明顯的雙核或多核，細(xì)胞有向外延展趨勢，細(xì)胞間邊界不清(圖1B)。此外，按上述方法分離出的原代肝細(xì)胞在體外可存活1周左右，其中3～5d狀態(tài)比較好，第6天開始細(xì)胞凋亡增加 上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞值得信賴。歡迎來電咨詢上海中喬新舟...

小鼠原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)詳細(xì)操作步驟，工作液配制：：：10%水合氯醛，三蒸水5ml（4℃保存，）（1L）：16401袋，，NaHCO32g，酸鈉，加青霉素、鏈霉素，3nMinsulin15μl（），1nM1μl（1mM）1000ml水。調(diào)節(jié)PH值至，過濾除菌。（也可以用DMEM含酸鈉培養(yǎng)基）μg/ml膠原溶液：1μl純乙酸+μl水=（200μl乙酸+），過濾除菌。在(）。7.肝素2mg/ml:肝素鈉20mg,水10ml。8.灌流夜1:50ml/次：Kreb液50ml,50mMEGTA液。9.灌流夜2:30ml/次：Kreb液30ml，μl，膠原酶I15mg(現(xiàn)用現(xiàn)加)。 上海中喬...

目前，NAFLD動物模型和細(xì)胞模型仍然是研究NAFLD發(fā)病機制及藥物防治的重要手段。動物模型雖然能很好地模擬體內(nèi)環(huán)境，但是存在造模周期長、個體差異大、實驗結(jié)果難以控制等問題，而細(xì)胞模型個體差異小、影響因素較少、實驗條件可控性強[8-11]。鑒于細(xì)胞模型能較好地克服動物模型的不利因素，因此，建立NAFLD體外細(xì)胞模型對于研究其發(fā)病機制，為進一步防治NAFLD具有重要的理論意義與普遍的實用價值。肝脂肪變性細(xì)胞模型是公認(rèn)的研究NAFLD有效的細(xì)胞模型，目前多采用肝細(xì)胞株HepG2，通過給予不同比例與濃度的游離脂肪酸(freefattyacids,FFA)混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，誘...

傳代培養(yǎng)：1.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代。2.培養(yǎng)液瓶打開后，過酒精燈火焰，置酒精燈火焰周圍。3.拿出直頭滴管，套上橡皮吸頭，過火，放入培養(yǎng)液瓶中。4.打開培養(yǎng)瓶，瓶口過火，將培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液輕輕倒入廢液缸，用2-3mLPBS洗去殘留的舊培養(yǎng)基。5.培養(yǎng)瓶加入，用量以薄薄蓋滿一層為宜，37℃消化，倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞收回突起變圓時立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉，加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基。6.取彎頭滴管反復(fù)吹打細(xì)胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn)，以利于CO...

常見的肝細(xì)胞系有HepG2，Hepa1-6等，HepG2是來源于一個15歲白人的肝組織；Hepa1-6來源于小鼠肝，兩者都屬于永生細(xì)胞系，當(dāng)然也有永生細(xì)胞系具有的通性缺點，如與正常肝臟細(xì)胞相比遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，生物學(xué)特性會隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加而發(fā)生遷移等。原代細(xì)胞是指從機體獲取組織細(xì)胞后的培養(yǎng)。由于離體時間短，因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性，與細(xì)胞系相比，是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。肝臟是作為機體“”的代謝，其組成是極其復(fù)雜的，除了肝細(xì)胞，還包含眾多內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞等組分，各類細(xì)胞功能各異并相互交流，共同決定肝臟的代謝表型。因此，當(dāng)我們要研究某一表型究竟是由于肝細(xì)胞自身的變化...

原代肝細(xì)胞屬于高度分化的細(xì)胞，對體外培養(yǎng)條件的要求比傳代細(xì)胞高，其在體外存活時間也比傳代細(xì)胞短，采用單層膠原培養(yǎng)法進行體外培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞存活時間為1周左右[25]。本實驗是在Seglen兩步灌流法的基礎(chǔ)上進行改進，結(jié)合逆向灌流、多次低速離心等方法成功分離獲取活率高、純度高的原代肝細(xì)胞，且體外存活時間可達1周，與文獻[25]報道一致。體外培養(yǎng)48h后給予不同濃度的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)進行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)24h后油紅O染色顯示肝細(xì)胞內(nèi)有脂滴沉積，肝細(xì)胞內(nèi)TG含量增加，且隨著FFA濃度升高而增加，成功構(gòu)建了肝脂肪變性細(xì)胞模型。本方法操作簡單、時間短、成功率高，因此具有廣泛應(yīng)用價值。上海中...

細(xì)胞傳代常用的儀器和試劑傳代細(xì)胞時，使用無菌技術(shù)和合適的試劑及設(shè)備尤為重要。針對您的細(xì)胞系選擇合適的培養(yǎng)液來得到比較好的生長和擴增很關(guān)鍵。每一個細(xì)胞系都有特定的生長營養(yǎng)組分配方，但是大多數(shù)細(xì)胞系起碼需要的添加物有以下這些：血清，如胎牛血清，需熱處理滅活其胎牛成分，它為細(xì)胞生長提供重要的生長因子。，如青霉素和鏈霉素用于防止細(xì)胞污染。其他的生長因子，如成纖維細(xì)胞生長因子，有助于延長細(xì)胞系的生長和擴增。不使用時，要將這些添加物或者“完全”細(xì)胞培養(yǎng)液保存于4攝氏度。首先要注意細(xì)胞培養(yǎng)液的顏色，富含營養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當(dāng)細(xì)胞耗盡培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分時，開始在培...

結(jié)合國內(nèi)外小鼠原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)的方法并加以改良，成功獲得了產(chǎn)量高、活率高、純度高的原代肝細(xì)胞，在此基礎(chǔ)上采用不同濃度的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)誘導(dǎo)貼壁的原代肝細(xì)胞，成功構(gòu)建了肝脂肪變性細(xì)胞模型，并且能夠很好地模擬體內(nèi)肝實質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)累積的現(xiàn)象。由于肝脂肪變性細(xì)胞模型還存在一定的局限性，如不能充分模擬肝臟局部微環(huán)境對NAFLD發(fā)病過程的影響，因此還需將細(xì)胞模型與動物模型相互聯(lián)系起來，使兩種模型相互補充，取長補短，為進一步研究NAFLD的發(fā)病機制及藥物治療奠定基礎(chǔ)。原代肝細(xì)胞的用途？歡迎致電上海中喬新舟！廣東哥廷根小型豬原代肝細(xì)胞系 隨著人們飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的改變，脂肪肝的...

高活力原代小鼠肝細(xì)胞的分離與純化，目的建立一種穩(wěn)定的能獲得高活力和高純度原代小鼠肝細(xì)胞的分離和純化方法.方法對傳統(tǒng)的兩步原位膠原酶灌注法進行4個方面的優(yōu)化,主要包括選擇逆向灌流,將持續(xù)灌注法改為間斷灌注后夾閉門靜脈法,嚴(yán)格控制膠原酶消化時間和將分離的肝細(xì)胞懸液進行低速Percoll單密度離心純化.分離后的肝細(xì)胞進行體外培養(yǎng).肝細(xì)胞活力和得率用臺盼藍染色法檢測.結(jié)果新鮮分離的小鼠原代肝細(xì)胞活力能穩(wěn)定達到87%±3%,平均活細(xì)胞總數(shù)為8×10^5每克小鼠體重,絕大部分細(xì)胞在體外培養(yǎng)2h后貼壁生長.結(jié)論優(yōu)化后的肝細(xì)胞分離方法更為穩(wěn)定,有效,分離到的肝細(xì)胞具有高活力的優(yōu)點. 上海的 原代肝細(xì)胞服務(wù)...

原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)采用Seglen門靜脈兩步灌流法及其改良方法分離小鼠原代肝細(xì)胞，多次低速離心純化肝實質(zhì)細(xì)胞，采用單層膠原培養(yǎng)法進行體外培養(yǎng)[15-18]。具體操作：雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射1%鈉(50mg/kg)麻醉后，浸泡于75%乙醇中消毒1～2min，在無菌條件下(超凈工作臺中)剪開腹部并暴露下腔靜脈與肝門靜脈。將靜脈留置針插入下腔靜脈后，迅速剪斷肝門靜脈。用無鈣無鎂的PBS緩沖液(含EDTA)灌流約50mL，在整個過程中，灌流液的灌流速度保持在7～8mL/min，溫度保持在37℃左右。待肝臟血液排出，肝臟變白后，用IV型膠原酶緩沖液()進行原位消化，灌注膠原酶時...

細(xì)胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細(xì)胞進行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細(xì)胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個或幾個容器中擴大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細(xì)胞的代數(shù)。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，...

小鼠原代肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察本實驗在Seglen兩步灌流法的基礎(chǔ)上改進，平均每只小鼠肝臟可獲得3×107～5×107個細(xì)胞。臺盼藍染色結(jié)果顯示，即時分離的原代肝細(xì)胞活率可達到85%～90%。即時分離的原代肝細(xì)胞胞體呈圓形或類圓形，多為單核或雙核，細(xì)胞間邊界清晰(圖1A)。接種后的肝細(xì)胞4h開始貼壁，24h大部分肝細(xì)胞貼壁，細(xì)胞形態(tài)多呈多角形或不規(guī)則形，細(xì)胞核大而圓，可見明顯的雙核或多核，細(xì)胞有向外延展趨勢，細(xì)胞間邊界不清(圖1B)。此外，按上述方法分離出的原代肝細(xì)胞在體外可存活1周左右，其中3～5d狀態(tài)比較好，第6天開始細(xì)胞凋亡增加 歡迎致電上海中喬新舟咨詢 原代肝細(xì)胞。歡迎來電咨詢上海中喬...

原代培養(yǎng)：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內(nèi)，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計數(shù)。7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。面做好...

HBV是一種包膜DNA病毒，只能在高度分化的人肝細(xì)胞中復(fù)制。HBV的復(fù)制模板以游離的、共價閉合的環(huán)狀DNA（cccDNA）形式存在于細(xì)胞的核中。批準(zhǔn)使用的核苷（酸）類似物可以有效抑制病毒血癥，但它們無一靶向cccDNA，也就不能有效地徹底乙肝。因此，進行體外研究來鑒定和開發(fā)新的抗病毒策略，尤其是沉默或降解cccDNA的策略非常有必要。由于肝細(xì)胞是HBV的天然靶細(xì)胞，因此新鮮制備或高質(zhì)量的冷凍人原代肝細(xì)胞（PHH）是HBV體外研究的金標(biāo)準(zhǔn)。PHH是非轉(zhuǎn)化細(xì)胞，對HBV高度易感并有效支持HBV復(fù)制的所有步驟。但由于從分離后接種到塑料培養(yǎng)皿上它們就開始去分化，在一段時間的體外培養(yǎng)后會失去...

肝前體樣細(xì)胞HepLPCs在基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用方面展現(xiàn)了廣闊前景。移植誘導(dǎo)分化的HepLPCs-Hep進入FAH基因缺陷聯(lián)合免疫缺陷小鼠體內(nèi)，并在小鼠血液中可檢測到人特異性ALB和AAT分泌，實現(xiàn)有效地定植并重建受損肝臟，為通過移植體外擴增人肝細(xì)胞代謝性肝病，這也提示我們通過自體或異體肝細(xì)胞移植替代原位肝移植，急慢性肝損傷疾病可能。此外，HepLPCs在體外三維培養(yǎng)形成的類樣組織球還可用于HBV與藥篩研究，除驗證了CRISPR/Cas9技術(shù)在HBV中的潛在價值外，其對HBV穩(wěn)定而長期的也有利于對HBV病毒更深入地觀察和研究。 原代肝細(xì)胞如何選擇？上海中喬新舟告訴您。歡迎來電咨詢上海中喬新舟...

幾種慢性肝病(CLD)，包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)，引起肝細(xì)胞損傷和壞死，進而引發(fā)炎癥和以細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)積累為特征的傷口愈合反應(yīng)。如果損傷是急性的或自限性的，傷口愈合反應(yīng)會迅速恢復(fù)正常組織穩(wěn)態(tài)和肝臟結(jié)構(gòu)。然而，如果損傷持續(xù)存在，隨之而來的慢性炎癥和ECM積累會超過肝臟再生的能力，導(dǎo)致纖維化并終導(dǎo)致肝硬化，這是一種預(yù)后不佳的肝臟疾病，也是發(fā)展為肝細(xì)胞(HCC)的主要危險因素。原代肝細(xì)胞的規(guī)格介紹。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！福建綿羊原代肝細(xì)胞系 在原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)過程中有以下幾個關(guān)鍵操作要點：(1)灌流的溫度。實驗開...

細(xì)胞復(fù)蘇：①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入（T25瓶）②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存...

常見的肝細(xì)胞系有HepG2，Hepa1-6等，HepG2是來源于一個15歲白人的肝組織；Hepa1-6來源于小鼠肝，兩者都屬于永生細(xì)胞系，當(dāng)然也有永生細(xì)胞系具有的通性缺點，如與正常肝臟細(xì)胞相比遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，生物學(xué)特性會隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加而發(fā)生遷移等。原代細(xì)胞是指從機體獲取組織細(xì)胞后的培養(yǎng)。由于離體時間短，因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性，與細(xì)胞系相比，是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。肝臟是作為機體“”的代謝，其組成是極其復(fù)雜的，除了肝細(xì)胞，還包含眾多內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞等組分，各類細(xì)胞功能各異并相互交流，共同決定肝臟的代謝表型。因此，當(dāng)我們要研究某一表型究竟是由于肝細(xì)胞自身的變化...

小鼠原代肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察本實驗在Seglen兩步灌流法的基礎(chǔ)上改進，平均每只小鼠肝臟可獲得3×107～5×107個細(xì)胞。臺盼藍染色結(jié)果顯示，即時分離的原代肝細(xì)胞活率可達到85%～90%。即時分離的原代肝細(xì)胞胞體呈圓形或類圓形，多為單核或雙核，細(xì)胞間邊界清晰(圖1A)。接種后的肝細(xì)胞4h開始貼壁，24h大部分肝細(xì)胞貼壁，細(xì)胞形態(tài)多呈多角形或不規(guī)則形，細(xì)胞核大而圓，可見明顯的雙核或多核，細(xì)胞有向外延展趨勢，細(xì)胞間邊界不清(圖1B)。此外，按上述方法分離出的原代肝細(xì)胞在體外可存活1周左右，其中3～5d狀態(tài)比較好，第6天開始細(xì)胞凋亡增加 原代肝細(xì)胞服務(wù)哪家好？上海中喬新舟告訴您。歡迎來電咨詢上海...

復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：1.收到細(xì)胞后，請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們。2.75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細(xì)胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。3.建議收到當(dāng)天不要消化處理，如果細(xì)胞長滿90%，可選擇傳代處理。4.如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題，出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供重發(fā)服務(wù)。原代肝細(xì)胞的廠家哪個好？上海中喬新舟告訴您。河南脂肪原代肝細(xì)胞 原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)采用Seglen門靜脈兩步灌流法及其改良方法分...

不能用手觸及已消毒器皿瓶口、瓶塞內(nèi)部，吸管前部等所有可能與細(xì)胞接觸的部分，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。開啟、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時，火焰滅菌時間要短。防止因溫度過高燒死細(xì)胞。換液時傾倒廢液，瓶口不能接觸廢液缸，速度不能過快，防止廢液四濺。吹打細(xì)胞時，要注意邊角的細(xì)胞是否吹打下來。手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上，即不可以在開放容器上方操作。每次操作只處理一株細(xì)胞，以免造成細(xì)胞交叉污染。注意自身的安全，對于來自人源性或病毒的細(xì)胞株應(yīng)特別小心。操作過程中，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如DMSO，并避免尖銳物品傷人等。從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)...

原代肝細(xì)胞分離試劑盒說明書實驗方案參考一、設(shè)備和試劑準(zhǔn)備（一）儀器設(shè)備（組織塊）超凈工作臺或者生物安全柜、水浴鍋、一次性100mm培養(yǎng)皿1個、滅菌剪刀和鑷子若干、滅菌100mL搖瓶、電動移液器、一次性15/50mL離心管若干、一次性50mL注射器及μm過濾器若干、100mL無菌試劑瓶、離心機、一次性5ml巴氏吸管、75%酒精及其噴壺、、碎冰、泡沫盒。（二）儀器設(shè)備（實體消化）超凈工作臺或者生物安全柜、水浴鍋、蠕動泵（LongerPump，YZ1515X）、手推式電動廢液缸、一次性100mm培養(yǎng)皿1個、乳膠管（滅菌、長度168cm，規(guī)格充滿14ml液體）、滅菌剪刀和鑷子若干、滅菌動脈夾、滅菌...

原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)采用Seglen門靜脈兩步灌流法及其改良方法分離小鼠原代肝細(xì)胞，多次低速離心純化肝實質(zhì)細(xì)胞，采用單層膠原培養(yǎng)法進行體外培養(yǎng)[15-18]。具體操作：雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射1%鈉(50mg/kg)麻醉后，浸泡于75%乙醇中消毒1～2min，在無菌條件下(超凈工作臺中)剪開腹部并暴露下腔靜脈與肝門靜脈。將靜脈留置針插入下腔靜脈后，迅速剪斷肝門靜脈。用無鈣無鎂的PBS緩沖液(含EDTA)灌流約50mL，在整個過程中，灌流液的灌流速度保持在7～8mL/min，溫度保持在37℃左右。待肝臟血液排出，肝臟變白后，用IV型膠原酶緩沖液()進行原位消化，灌注膠原酶時...

原代培養(yǎng)：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內(nèi)，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計數(shù)。7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。面做好...

常見的肝細(xì)胞系有HepG2，Hepa1-6等，HepG2是來源于一個15歲白人的肝組織；Hepa1-6來源于小鼠肝，兩者都屬于永生細(xì)胞系，當(dāng)然也有永生細(xì)胞系具有的通性缺點，如與正常肝臟細(xì)胞相比遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，生物學(xué)特性會隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加而發(fā)生遷移等。原代細(xì)胞是指從機體獲取組織細(xì)胞后的培養(yǎng)。由于離體時間短，因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性，與細(xì)胞系相比，是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。肝臟是作為機體“”的代謝，其組成是極其復(fù)雜的，除了肝細(xì)胞，還包含眾多內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞等組分，各類細(xì)胞功能各異并相互交流，共同決定肝臟的代謝表型。因此，當(dāng)我們要研究某一表型究竟是由于肝細(xì)胞自身的變化...

肝臟原位灌注法：（為分離肝細(xì)胞的經(jīng)典方法）1，在38度-39度的水浴槽中預(yù)熱hepes緩沖液和膠原酶液，使其在肝內(nèi)達到37度。2，給大鼠（180-200g）腹腔注射巴比妥鈉100ul/100g，從古靜脈注射肝素1000u，打開腹腔，在門靜脈的肝外5mm處松松的放一個結(jié)扎線環(huán)，將血管套管插入至肝掌，結(jié)扎，快速切開肝下血管與面壓力過高，關(guān)注500ml無鈣hepes緩沖液，流速為30ml/min，數(shù)秒鐘肝臟即變白。3，灌注300ml膠原酶液，流速15ml/min，持續(xù)20min。肝臟腫大。4，切下肝臟。用hepes緩沖液沖洗。切開肝纖維囊，收集消化清洗液被并混入100mlleibovit...

HBV是一種包膜DNA病毒，只能在高度分化的人肝細(xì)胞中復(fù)制。HBV的復(fù)制模板以游離的、共價閉合的環(huán)狀DNA（cccDNA）形式存在于細(xì)胞的核中。批準(zhǔn)使用的核苷（酸）類似物可以有效抑制病毒血癥，但它們無一靶向cccDNA，也就不能有效地徹底乙肝。因此，進行體外研究來鑒定和開發(fā)新的抗病毒策略，尤其是沉默或降解cccDNA的策略非常有必要。由于肝細(xì)胞是HBV的天然靶細(xì)胞，因此新鮮制備或高質(zhì)量的冷凍人原代肝細(xì)胞（PHH）是HBV體外研究的金標(biāo)準(zhǔn)。PHH是非轉(zhuǎn)化細(xì)胞，對HBV高度易感并有效支持HBV復(fù)制的所有步驟。但由于從分離后接種到塑料培養(yǎng)皿上它們就開始去分化，在一段時間的體外培養(yǎng)后會失去...

然而，這些復(fù)雜的方法無法進行大規(guī)模的實驗，在2D單層培養(yǎng)中維持分化的PHH依然重要。在這方面，近測試了一組化學(xué)物質(zhì)，而且鑒定了5種補充劑的一個組合（5C-medium，5C培養(yǎng)基），包括Forskolin（腺苷酸環(huán)化酶抑制劑），SB431542(TGF-β抑制劑)，IWP2（Wnt抑制劑），DAPT(Notch抑制劑)以及LDN193189(BMP抑制劑)，可以維持PHH分化狀態(tài)30天。不同于DMSO處理需要14天，F(xiàn)orskolin可以在72h內(nèi)誘導(dǎo)HepaRG細(xì)胞發(fā)生功能性極化。SB431542和DAPT也被用于在3D培養(yǎng)條件下使肝祖細(xì)胞樣細(xì)胞分化，并用HBV它們。盡管這些發(fā)現(xiàn)...

新的化合物可能引起各類組織的毒性損傷，這些毒性可以在相應(yīng)的2D或3D培養(yǎng)的細(xì)胞模型中進行早期檢測，為藥物研發(fā)提供重要參考資料。藥物代謝與過程主要發(fā)生在肝臟，因此肝臟是易受到毒物影響的受累，肝臟毒性也是藥物安全性檢測時必須要測試的項目之一。原代肝細(xì)胞作為一種體外模型，在藥學(xué)研究方面具有極大優(yōu)勢——能獲得大量性狀較為統(tǒng)一的樣本，很好的保留了與體內(nèi)一致的細(xì)胞色素P450酶的水平，基本維持了肝臟在體內(nèi)時的代謝功能。無論是機理性研究還是肝毒性研究都非常合適。因此在藥物研發(fā)的臨床前階段和臨床階段，在毒代動力學(xué)中，使用包括人類在內(nèi)的哺乳動物的原代肝細(xì)胞，建立體外肝模型，是優(yōu)先的研究方式。原代肝細(xì)胞的市場價格...

原代肝細(xì)胞培養(yǎng)物可用作置換組織或。利用原代細(xì)胞重建受損組織或替換無功能的細(xì)胞或組織的研究正在進行中。培養(yǎng)技術(shù)和研究正在胚胎和成人干細(xì)胞培養(yǎng)上進行。這些細(xì)胞具有分化為許多不同類型的細(xì)胞和的能力。通過控制這些細(xì)胞的發(fā)育和分化，我們也許能夠多種醫(yī)學(xué)疾病。原代細(xì)胞也已普遍用于3D生物打印應(yīng)用中。干細(xì)胞療法：從骨髓、血液或胚胎中分離出來的干細(xì)胞涉及原代細(xì)胞培養(yǎng)。患者自己的干細(xì)胞或來自供體的干細(xì)胞在體外生長，以產(chǎn)生足夠的細(xì)胞，這些細(xì)胞可用于再生組織或替代功能缺陷的細(xì)胞。這個領(lǐng)域正在探索中，以設(shè)計針對遺傳疾病、脊髓損傷、退行性疾病和的療法。 上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞品質(zhì)保障。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！安...