核酸提取磁珠通過對磁珠進行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),從而可以實現(xiàn)對核酸的高通量、自動化提取,這一技術產生于20世紀80年代,已經有了成熟的試劑盒并形成為產業(yè)。隨著基因檢測、個性化給藥、產前診斷等的普及,在生物行業(yè)各領域都追求高通量、自動化的***,傳統(tǒng)DNA提取方法的局限愈來愈明顯,而磁珠法DNA提取的優(yōu)勢則愈來愈明顯:①能夠實現(xiàn)自動化、大批量操作,已有96孔的核酸自動提取儀,用一個樣品的提取時間即可實現(xiàn)對96個樣品的處理,符合生物學高通量的操作要求,使得傳染性疾病爆發(fā)時能夠進行快速及時的應對,這一特點使得傳統(tǒng)方法望塵莫及;②操作簡單、用時短,整個提取流程只有四步,大多可以在36-40分鐘內完成;③安全無毒,不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑,對實驗操作人員的傷害減少到**少,完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念;④磁珠與核酸的特異性結合使得提取的核酸純度高、濃度大。免疫磁珠陰性法富集惡性胸腔積液中腫瘤細胞方法的建立。甘肅COIP免疫磁珠生產廠家
免疫磁珠法(MACS):免疫磁珠法是2O世紀80年代出現(xiàn)的技術方法。1983年Ugelstad提出將免疫磁珠用于細胞分選,1990年,Mihenyi建立了MACS。這一方法的**是在磁珠表面包被具免疫反應性的抗體進行抗原抗體反應,在細胞表面形成玫瑰花結,這些結合了磁珠的細胞一旦置于強大的磁場下,就會與其他未被結合的細胞分群,具***順磁場的磁珠脫離磁場后立即消失磁性,這樣就可以篩選或去除所標記的細胞,從而達到陽性或陰性選擇細胞的目的。這一技術已經***運用于細胞及分子生物學,分離基因、靶細胞及造血干細胞等。其分離效果得到了免疫熒光、PCR、FISH及FACS等方法的確認。免疫磁珠可以有效地分選細胞,從而決定了這一方法在神經干細胞分選中應用的技術可行性。天津蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠批量定制應用免疫磁珠分離法純化弓形蟲速殖子的研究。
免疫共沉淀(COIP)實驗過程(1)轉染后24-48h可收獲細胞,加入適量細胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min,細胞裂解液于4°C,最大轉速離心30min后取上清;(2)取少量裂解液以備Westernblot分析,剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;(3)取10μlproteinA瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3次,每次3,000rpm離心3min;(4)將預處理過的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與proteinA瓊脂糖珠耦聯(lián);(5)免疫沉淀反應后,在4°C以3,000rpm速度離心3min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;***加入15μl的2×SDS上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;(6)SDS-PAGE,Westernblotting或質譜儀分析。注意的問題:(1)細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內存在的所有蛋白質-蛋白質相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或TritonX-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑,如商品化的cocktailer。(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。(3)使用對照抗體:
免疫共沉淀檢測(CO-IP)BEENbio提供免疫共沉淀(CO-IP)檢測服務??蓪煞N已知蛋白是否存在相互作用進行驗證,也可以驗證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實驗方法為將靶蛋白(X)與目的蛋白(Y)在同一細胞內孵育,形成“靶蛋白-目的蛋白”復合物。將靶蛋白的特異性抗體與復合物共孵育,形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復合物,利用ProterinA/G純化。通過SDS-PAGE銀染,結合WesternBlot及液相質譜等對兩種蛋白之間是否存在相互作用進行定性分析。服務優(yōu)勢?使用銀染技術,靈敏度是考馬斯亮藍100倍,SDS-PAGE電泳結果更加清晰;?擁有液相質譜及Fortebio等完整配套檢測設備,可對檢測結果進一步分析;?實驗重復進行兩次,排除隨機因素影響,結果更加可靠;?擁有蛋白、抗體等制備平臺,您只需提供序列便可完成全部實驗;上海普平生物科技有限公司免疫磁珠擁有完善的售后。
BEENbio鏈霉親和素磁珠本產品是由磁性納米顆粒與高純度的鏈霉親和素共價偶聯(lián)而成。這種微球能用于捕獲生物素標記的底物,如抗原、抗體和核酸等。鏈霉親和素(streptavidin)與生物素(biotin)的結合是***的非共價生物交互作用之一,因此,這也是親和層析法所使用的一種強大工具。生物分子可以與生物素輕松融合,而層析基質上固定的鏈霉親和素配體可以與之結合,而且這種鏈霉親和素-生物素相互作用具有較低的非特異親和性,捕獲所需的底物能夠直接應用于后續(xù)實驗。本產品可廣泛應用于免疫學檢測、核酸純化、核酸固相雜交檢測、細胞分選等分子生物學實驗。免疫磁珠技術在tumor學中的應用。湖南anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠銷售
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建立檢測人血清抗白***烯醇化酶(Eno)IgG類抗體的免疫磁珠法,并評估其在***血癥診斷中的價值。方法將Eno重組蛋白耦聯(lián)至磁性微珠上,以辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗人IgG為二抗,優(yōu)化免疫磁珠法的反應條件,考察其精密度和特異性。收集經血培養(yǎng)確診的***血癥患者(n=113)、***定植者(n=50)、細菌菌血癥患者(n=30)和健康人對照者(n=100)血清,用免疫磁珠法測定抗Eno抗體,并與ELISA法結果進行比較。結果免疫磁珠法測定抗Eno抗體的批內、批間變異系數(shù)(CV)分別為8.2%和14.2%,重組Eno抗原對相應抗體的阻斷率為91.6%。以吸光度(A)值0.29為cutoff值時,診斷***血癥的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為80.5%、92.3%、90.1%和84.5%。免疫磁珠法的敏感性和特異性與ELISA法比較無統(tǒng)計學差異,但檢測流程從37℃2.5h縮短至常溫1h。結論免疫磁珠法檢測抗EnoIgG類抗體簡便、快捷、可靠,在侵襲性******研究中具有潛在的應用價值。甘肅COIP免疫磁珠生產廠家
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