免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細(xì)胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實(shí)驗(yàn)于2006—07/08在南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成。6~8周齡的SPF級(jí)純系BALB,C雄性小鼠10只,體質(zhì)量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細(xì)胞,利用免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng),通過(guò)兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細(xì)胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細(xì)胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細(xì)胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按500μL/10^8加入Buffer重懸細(xì)胞。Buffer 500μL潤(rùn)MS柱,懸液過(guò)柱后,Buffer 500μL/次洗柱3次,柱子脫離磁場(chǎng),加1mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit^+lin^-細(xì)胞,收集到c-kit^+lin-細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)。取2.0x108個(gè)細(xì)胞分成10等份,流式細(xì)胞儀分析c-Kit^+lin^-細(xì)胞純度,計(jì)算回收率,評(píng)估純化效率,苔盼蘭染色檢測(cè)純化前后的細(xì)胞活力。計(jì)算活細(xì)胞的百分率。細(xì)胞純度和細(xì)胞回收率的計(jì)算:細(xì)胞純度:分離產(chǎn)物中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),分離細(xì)胞的總細(xì)胞數(shù)×100%,細(xì)胞回收率:分離產(chǎn)物中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),起始標(biāo)本陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)×100%。BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。黑龍江anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本,通過(guò)剪切,消化和吹打成單細(xì)胞懸液,篩網(wǎng)過(guò)濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細(xì)胞,用神經(jīng)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞球,取第3代進(jìn)行誘導(dǎo)分化,分化前后用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)方法鑒定**干細(xì)胞及分化后細(xì)胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133^+細(xì)胞,可懸浮生長(zhǎng)并形成神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞球,有較強(qiáng)的增殖能力,干細(xì)胞標(biāo)志物巢蛋白(nestin)陽(yáng)性,分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型.結(jié)論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細(xì)胞混雜生長(zhǎng)的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細(xì)胞中分離出只占極少比例的**干細(xì)胞,細(xì)胞結(jié)合磁珠后在體外可以長(zhǎng)期培養(yǎng)和傳代,進(jìn)一步證實(shí)了**干細(xì)胞的存在,并為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的研究奠定基礎(chǔ).浙江protein A/G COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起密度梯度離心聯(lián)合上皮細(xì)胞黏附分子免疫磁珠富集法檢測(cè)卵巢Cancer循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性.

戊二醛兩步交聯(lián)法將辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合于甲胎蛋白 (AFP)抗體上制成酶標(biāo)AFP抗體,質(zhì)量鑒定結(jié)果表明其比活性為200 U/mg,抗體效價(jià)為1: 256,滿足酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)要求;通過(guò)滴定法確定酶標(biāo)AFP抗體的**適工作稀釋度為V(酶標(biāo)抗體): V(磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液)=1: 160;血清用量及孵育時(shí)間的影響實(shí)驗(yàn)表明:血清100 μL,孵育時(shí)間2 h為比較好測(cè)定條件.建立了肝*患者血清AFP免疫磁珠ELISA法的規(guī)范化檢測(cè)程序.初步應(yīng)用實(shí)驗(yàn)顯示:免疫磁珠ELISA法測(cè)定受試健康組血清AFP值 平均為3.9 ng/mL,肝*組血清AFP值平均為316.7 ng/mL,對(duì)肝*診斷陽(yáng)性率為72.0%.批內(nèi)及批間CV值分別為5.05%和8.20%.該項(xiàng)技術(shù)有較高的靈敏度和很好的特異性,操作簡(jiǎn)便,分離快 速,適用于肝*的初期快速診斷.

免疫磁珠法分離細(xì)胞是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場(chǎng)中，通過(guò)抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場(chǎng)中，無(wú)該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒(méi)有磁性，不在磁場(chǎng)中停留，從而使細(xì)胞得以分離。免疫磁珠應(yīng)用分為正選法和負(fù)選法：正選法－磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞負(fù)選法－磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞，一般而言，負(fù)選法比正選法的磁珠用量大磁珠：大小在0.1－0.45mm包被了生產(chǎn)的高質(zhì)量單抗磁珠已為白細(xì)胞亞群的分選所優(yōu)化將包被了特異性單抗的BDIMag磁珠加入細(xì)胞懸液，磁珠特異性地與有相應(yīng)抗原的細(xì)胞亞群結(jié)合，通過(guò)分離得到的連有磁珠的細(xì)胞可直接用于功能試驗(yàn)和用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展。

免疫磁珠分離法純化抗血清的實(shí)驗(yàn)條件,并與A蛋白親和層析法比較純化效果,以求得到一種簡(jiǎn)便,快速,高效的純化IgG方法.結(jié)果表明:從5只新西蘭兔獲得210 mL試管凝集效價(jià)高達(dá)1:5 120的兔抗鰻弧菌抗血清,磁珠與IgG結(jié)合10 min達(dá)到平衡,其比較大結(jié)合量為0.227 mg/mL;免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法得到的IgG純度都很高,經(jīng)過(guò)SDS-PAGE電泳都只得到25 ku和55 ku左右的兩條帶;免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價(jià)高于A蛋白親和層析法;免疫磁珠分離法反應(yīng)所需時(shí)間(10 min)小于A蛋白親和層析法所需的20 min,其得率(11.5 mg/mL)也高于A蛋白親和層析法的10.25 mg/mL.BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。湖北蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠生產(chǎn)廠家

免疫磁珠的制備及其富集,分離單增李斯特菌的研究。黑龍江anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細(xì)胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學(xué)特性.方法:留取人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤新鮮標(biāo)本,分離獲得腦腫瘤細(xì)胞.應(yīng)用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選陽(yáng)性率;神經(jīng)球計(jì)數(shù)法分析CD133+/-亞群細(xì)胞神經(jīng)球形成情況;免疫熒光方法檢測(cè)CD133+/-亞群細(xì)胞表面神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)標(biāo)記物CD133,神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達(dá)情況;檢測(cè)CD133+/-亞群細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后細(xì)胞表面分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)情況.結(jié)果:CD133+亞群細(xì)胞具有干細(xì)胞特性,可形成明顯的神經(jīng)球,具有自我更新和明顯的增殖能力,并且NSCs標(biāo)記物CD133,nestin表達(dá)陽(yáng)性,經(jīng)誘導(dǎo)分化后分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)陽(yáng)性;CD133-亞群細(xì)胞無(wú)上述特性.結(jié)論:CD133免疫磁珠分選方法獲得的CD133+亞群細(xì)胞即為BTSCs,該方法可以得到高純度的BTSCs,可以用于BTSCs的實(shí)驗(yàn)研究.黑龍江anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

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