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浙江protein A/G COIP免疫磁珠批量定制

來源: 發(fā)布時間:2022-03-17

免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細(xì)胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細(xì)胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細(xì)胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細(xì)胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負(fù)分選,錐蟲藍(lán)拒染實驗計數(shù)MACS分選前后細(xì)胞活力.流式細(xì)胞儀鑒定分選后細(xì)胞純度;流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)細(xì)胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達(dá)情況.結(jié)果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細(xì)胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細(xì)胞生長良好,**長傳代到第20代.分選前后細(xì)胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無明顯差異;流式細(xì)胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細(xì)胞純度大于98%;流式細(xì)胞儀檢測hMAPCs中CD29陽性表達(dá)細(xì)胞比率為99.2%,CD44陽性細(xì)胞比率為98.3%,CD34陽性細(xì)胞比率為1.2%,HLA-DR陽性細(xì)胞比率為5.3%.結(jié)論:CD45,GlyA免疫微磁珠負(fù)分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養(yǎng)基中有較強(qiáng)的增殖能力.免疫磁珠純化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立。浙江protein A/G COIP免疫磁珠批量定制

偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描的增強(qiáng)作用.方法:經(jīng)尾靜脈注射SPC-A1-luc細(xì)胞建立肺腺*裸鼠模型,生物發(fā)光成像定量監(jiān)測**的大小.裸鼠分為:生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組,每周分別注射生理鹽水,750nm裸磁珠溶液和偶聯(lián)NJ001的750nm免疫磁珠溶液,于注射前和注射后4h進(jìn)行micro-CT掃描.利用免疫組織化學(xué)驗證**組織中NJ001特異性抗原SP70的表達(dá).結(jié)果:免疫磁珠組在第4周即可檢測到**,而生理鹽水組和裸磁珠組均到第6周才能檢測到.第6周生理鹽水組,裸磁珠組和免疫磁珠組micro-CT掃描**的灰度值分別為注射前的59.05±0.66,60.69±0.55和58.25±0.32,注射后的60.30±1.83,61.05±0.68和67.41±3.82.與注射前相比,免疫磁珠組注射后的灰度值***增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0079).生理鹽水組和裸磁珠組注射后的灰度值與注射前相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05).結(jié)論:偶聯(lián)單抗NJ001的免疫磁珠對肺腺*裸鼠模型micro-CT掃描有增強(qiáng)作用,并且有望用于肺*的早期診斷.廣東anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制基于免疫磁珠分散聚集狀態(tài)檢測病原體與Cancer癥標(biāo)志物。

COIP實驗步驟
第三步:免疫共沉淀
根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式,這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同,但是本質(zhì)是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。
如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads,先進(jìn)行細(xì)胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。
如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細(xì)胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結(jié)合,以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。
第四步:洗脫與檢測
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物洗脫,并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當(dāng)?shù)鞍谆蚩贵w對低 pH 的緩沖液敏感,可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項:
如后續(xù)需進(jìn)行酶活或功能性分析,則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進(jìn)行洗脫。
對于交聯(lián)劑結(jié)合的 beads,為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性,應(yīng)立即再生和存儲樹脂,保證抗體可以重復(fù)利用。

BEENbio鏈霉親和素磁珠本產(chǎn)品是由磁性納米顆粒與高純度的鏈霉親和素共價偶聯(lián)而成。這種微球能用于捕獲生物素標(biāo)記的底物,如抗原、抗體和核酸等。鏈霉親和素(streptavidin)與生物素(biotin)的結(jié)合是***的非共價生物交互作用之一,因此,這也是親和層析法所使用的一種強(qiáng)大工具。生物分子可以與生物素輕松融合,而層析基質(zhì)上固定的鏈霉親和素配體可以與之結(jié)合,而且這種鏈霉親和素-生物素相互作用具有較低的非特異親和性,捕獲所需的底物能夠直接應(yīng)用于后續(xù)實驗。本產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)檢測、核酸純化、核酸固相雜交檢測、細(xì)胞分選等分子生物學(xué)實驗。BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。

羥基淀粉沉淀去除臍血紅細(xì)胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細(xì)胞的簡易實用方法,通過造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)分析其在細(xì)胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對造血細(xì)胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,以甲纖半固體造血細(xì)胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細(xì)胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結(jié)果:臍血分離前,CD34+細(xì)胞純度為1.5%~3%,MACS分離后其純度可達(dá)85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達(dá)91%;CD34+造血祖細(xì)胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細(xì)胞因子組合擴(kuò)增培養(yǎng)9~14d,CD34+細(xì)胞在液體培養(yǎng)中有明顯擴(kuò)增,MACS分離后CD34+細(xì)胞總數(shù)增加39倍,羥基淀粉沉淀和MACS分離可增加45倍.結(jié)論:應(yīng)用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS系統(tǒng)可有效富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,羥基淀粉沉淀對CD34+細(xì)胞的富集,分離無影響;臍血細(xì)胞分離后作造血祖細(xì)胞培養(yǎng),可產(chǎn)生豐富的CFU-GM和BFU-E,說明羥基淀粉沉淀分離的CD34+細(xì)胞的增殖功能優(yōu)于MACS分離CD34+細(xì)胞的增殖功能.外周血微轉(zhuǎn)移前列腺Cancer細(xì)胞的免疫磁珠法檢測。河南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門

BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。浙江protein A/G COIP免疫磁珠批量定制

微小免疫磁珠分離提純SD胎鼠大腦皮層組織中的神經(jīng)干細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng),為研究神經(jīng)干細(xì)胞的特性與神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)和移植研究創(chuàng)造有利條件.方法取SD胎鼠的大腦皮層組織制成單細(xì)胞懸液,用微小磁珠(平均直徑≤50nm)分選出神經(jīng)巢蛋白(nestin)陽性的細(xì)胞群,以流式細(xì)胞術(shù)檢測陽性細(xì)胞純度,以臺盼藍(lán)染色法檢測細(xì)胞活性.結(jié)果分離的神經(jīng)干細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞nestin陽性表達(dá)率為(88.5±3.6)%,細(xì)胞存活率為(96.3±1.8)%.結(jié)論微小免疫磁珠法分離胎鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞群落簡便,有效,可以為神經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)和移植提供細(xì)胞來源.浙江protein A/G COIP免疫磁珠批量定制

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