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來源: 發(fā)布時間:2022-03-11

檢測EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細胞中表達的相關性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測組、MUC16免疫磁珠檢測組、2種磁珠均等混合檢測組。對來源于同一患者的等體積外周血樣本進行循環(huán)腫瘤細胞檢測,HE染色后鑒定檢測值。結果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對同體積、同來源樣本檢測值分別為22±11、14±6、28±12個腫瘤細胞(P0.05),說明檢測效率有統(tǒng)計學差異。結論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細胞中**表達且存在差異,因此增加MUC16這一***標志物可有效提高上皮性卵巢*CTCs檢出數(shù)量。自制免疫磁珠在前列腺tumor組織干細胞提取中的應用。陜西COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起

探討小鼠脾臟CD8+T細胞的免疫磁珠負性分選方法,并對分選后所得細胞進行純度、活力及功能檢測.方法以免疫磁珠負性分選法從小鼠脾臟細胞中分離CD8+T細胞,流式細胞術檢測所得細胞的純度,臺盼藍檢測細胞活力并用ConA刺激檢測增殖能力.結果經(jīng)過流式細胞儀測定免疫磁珠負性分選后的小鼠脾臟CD8+T細胞純度達到(91.6±3.6)%,臺盼蘭染色細胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細胞增殖.結論免疫磁珠負性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細胞,并且不影響分選靶細胞的細胞活力和功能.湖北anti-Flag COIP免疫磁珠生產(chǎn)廠家紅細胞膜免疫磁珠檢測成分血中抗A/抗B的研究。

用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價偶聯(lián)的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測定其回收率.結果:合成的MAP具有較強的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達79%.應用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經(jīng)鑒定與其他抗原表位無反應性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對某一抗原表位的特異性抗體,其性質類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應用前景.

COIP實驗步驟
第三步:免疫共沉淀
根據(jù)不同的抗體結合方式,這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同,但是本質是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復合物。
如果直接使用 Protein A/G 結合的 beads,先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復合物拉下來。
如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結合,以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。
第四步:洗脫與檢測
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物洗脫,并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當?shù)鞍谆蚩贵w對低 pH 的緩沖液敏感,可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項:
如后續(xù)需進行酶活或功能性分析,則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。
對于交聯(lián)劑結合的 beads,為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性,應立即再生和存儲樹脂,保證抗體可以重復利用。
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常見問題及對策

3: 如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現(xiàn)的聚集情況?

磁珠應保存在2~8℃,使用時應避免由于污染而導致的不可逆聚 集,或因干燥而導致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬 于正常現(xiàn)象,不影響磁珠的正常使用。在Binding buffer和Elution buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、 Tween-20 或 Triton X-100)可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過低pH洗脫操 作的磁珠可以用結合緩沖液洗滌至中性,然后用含有0.1% (v/v)Tween-20的Tris buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠,并用超聲波水浴 處理2min,即可使磁珠恢復均勻狀態(tài),以上處理均不影響磁珠的抗體 結合效率。

4: 如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象?

建議使用低吸附率的耗材進行磁珠操作。另外,在緩沖液中添加 0.01%~0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或 Triton X-100)可以有效降低磁珠對耗材的粘附。


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