檢測(cè)EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測(cè)組、MUC16免疫磁珠檢測(cè)組、2種磁珠均等混合檢測(cè)組。對(duì)來(lái)源于同一患者的等體積外周血樣本進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè),HE染色后鑒定檢測(cè)值。結(jié)果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對(duì)同體積、同來(lái)源樣本檢測(cè)值分別為22±11、14±6、28±12個(gè)腫瘤細(xì)胞(P0.05),說(shuō)明檢測(cè)效率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中**表達(dá)且存在差異,因此增加MUC16這一***標(biāo)志物可有效提高上皮性卵巢*CTCs檢出數(shù)量。免疫磁珠技術(shù)在tumor學(xué)中的應(yīng)用。江蘇protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門(mén)

COIP常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策

1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?

磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來(lái)源及所屬亞型有關(guān)，請(qǐng)確 認(rèn)抗體的類(lèi)型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過(guò)增加抗體與磁珠的孵育時(shí)間（ 30～120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強(qiáng)度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。

2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?

可以先將抗體與樣品進(jìn)行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時(shí)間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對(duì) 于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。 黑龍江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商免疫磁珠富集與免疫層析一體化檢測(cè)甲型流感病毒的研究。

免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本,通過(guò)剪切,消化和吹打成單細(xì)胞懸液,篩網(wǎng)過(guò)濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細(xì)胞,用神經(jīng)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞球,取第3代進(jìn)行誘導(dǎo)分化,分化前后用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)方法鑒定**干細(xì)胞及分化后細(xì)胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133^+細(xì)胞,可懸浮生長(zhǎng)并形成神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞球,有較強(qiáng)的增殖能力,干細(xì)胞標(biāo)志物巢蛋白(nestin)陽(yáng)性,分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型.結(jié)論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細(xì)胞混雜生長(zhǎng)的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細(xì)胞中分離出只占極少比例的**干細(xì)胞,細(xì)胞結(jié)合磁珠后在體外可以長(zhǎng)期培養(yǎng)和傳代,進(jìn)一步證實(shí)了**干細(xì)胞的存在,并為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的研究奠定基礎(chǔ).

抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進(jìn)行初步應(yīng)用。方法采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹(shù)脂DE52進(jìn)一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測(cè)乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細(xì)胞株,其中1F12細(xì)胞株分泌的抗體效價(jià)、相對(duì)親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達(dá)95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價(jià)為106,相對(duì)親和力為0.2mg/L,與FITC標(biāo)記的BSA可特異性結(jié)合;納米磁性粒子的平均粒徑為150nm,鐵含量為71.63%;羧基磁性微球的平均粒徑為210nm,羧基含量約為2.15mmol/g;每克羧基磁性微球可結(jié)合抗熒光素單克隆抗體約12mg,制備的免疫磁珠可有效結(jié)合熒光素標(biāo)記的蛋白。應(yīng)用抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的靈敏度高于ELISA試劑,檢測(cè)限達(dá)0.1ng/ml。結(jié)論成功制備了抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,其具有應(yīng)用于免疫檢測(cè)分析的價(jià)值。BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷(xiāo)。

戊二醛兩步交聯(lián)法將辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合于甲胎蛋白 (AFP)抗體上制成酶標(biāo)AFP抗體,質(zhì)量鑒定結(jié)果表明其比活性為200 U/mg,抗體效價(jià)為1: 256,滿足酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)要求;通過(guò)滴定法確定酶標(biāo)AFP抗體的**適工作稀釋度為V(酶標(biāo)抗體): V(磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液)=1: 160;血清用量及孵育時(shí)間的影響實(shí)驗(yàn)表明:血清100 μL,孵育時(shí)間2 h為比較好測(cè)定條件.建立了肝*患者血清AFP免疫磁珠ELISA法的規(guī)范化檢測(cè)程序.初步應(yīng)用實(shí)驗(yàn)顯示:免疫磁珠ELISA法測(cè)定受試健康組血清AFP值 平均為3.9 ng/mL,肝*組血清AFP值平均為316.7 ng/mL,對(duì)肝*診斷陽(yáng)性率為72.0%.批內(nèi)及批間CV值分別為5.05%和8.20%.該項(xiàng)技術(shù)有較高的靈敏度和很好的特異性,操作簡(jiǎn)便,分離快 速,適用于肝*的初期快速診斷.BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠全國(guó)招商代理。廣東anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠銷(xiāo)售

免疫磁珠負(fù)性富集結(jié)合免疫熒光抗體技術(shù)檢測(cè)卵巢Cancer患者外周血CTCs的方法建立和應(yīng)用。江蘇protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門(mén)

利用免疫磁珠法分選并鑒定人前列腺*類(lèi)干細(xì)胞.方法利用免疫磁珠法從人前列腺*細(xì)胞株P(guān)C3中分選CD133+/CD44+細(xì)胞,通過(guò)免疫組化,流式細(xì)胞術(shù),CCK8,平板克隆形成實(shí)驗(yàn)及裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)鑒定其表面標(biāo)志物表達(dá)情況及**干細(xì)胞特性.結(jié)果經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細(xì)胞比例為0.50%;免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表達(dá);其細(xì)胞增殖和克隆形成率高于PC3細(xì)胞;以低密度注射時(shí),其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC3細(xì)胞.結(jié)論利用免疫磁珠法可從人前列腺*細(xì)胞株P(guān)C3中高效的分選出具有**干細(xì)胞生物學(xué)特性的前列腺*類(lèi)干細(xì)胞.江蘇protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門(mén)

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