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天津anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起

來源： 發(fā)布時間：2022-03-09

常用的磁珠法DNA提取試劑盒，國外的有Dynal、Qiagen等，國內(nèi)將磁珠應用于核酸提取的研究起源于02年左右，經(jīng)過近些年的反復試驗，形成了穩(wěn)定的核酸提取體系，并已被***用于一些疾病（如乙肝、丙肝、結核菌）等的定量檢測（如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒）。國產(chǎn)磁珠法試劑盒與進口產(chǎn)品相比，已不單單是只具有價格優(yōu)勢，其產(chǎn)品的穩(wěn)定性、高效性、提取出的核酸的質(zhì)量與產(chǎn)量都足以與進口磁珠法試劑盒媲美。但是進口試劑盒長期以來形成的完善的銷售渠道對國產(chǎn)試劑盒的推廣是一大挑戰(zhàn)。多聚抗原肽免疫磁珠在制備單表位抗體中的應用。天津anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起

COIP實驗步驟
第三步：免疫共沉淀
根據(jù)不同的抗體結合方式，這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同，但是本質(zhì)是一樣的，都是為了形成抗原-蛋白復合物。
如果直接使用 Protein A/G 結合的 beads，先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育，再加入 beads 將蛋白-抗體復合物拉下來。
如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定，或者直接將抗體固定在 beads，則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結合，以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。
第四步：洗脫與檢測
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物洗脫，并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當?shù)鞍谆蚩贵w對低 pH 的緩沖液敏感，可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項：
如后續(xù)需進行酶活或功能性分析，則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。
對于交聯(lián)劑結合的 beads，為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性，應立即再生和存儲樹脂，保證抗體可以重復利用。
湖南protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好紅細胞膜免疫磁珠檢測成分血中抗A/抗B的研究。

微小免疫磁珠分離提純SD胎鼠大腦皮層組織中的神經(jīng)干細胞并進行培養(yǎng),為研究神經(jīng)干細胞的特性與神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)和移植研究創(chuàng)造有利條件.方法取SD胎鼠的大腦皮層組織制成單細胞懸液,用微小磁珠(平均直徑≤50nm)分選出神經(jīng)巢蛋白(nestin)陽性的細胞群,以流式細胞術檢測陽性細胞純度,以臺盼藍染色法檢測細胞活性.結果分離的神經(jīng)干細胞流式細胞儀檢測細胞nestin陽性表達率為(88.5±3.6)%,細胞存活率為(96.3±1.8)%.結論微小免疫磁珠法分離胎鼠腦神經(jīng)干細胞群落簡便,有效,可以為神經(jīng)干細胞的細胞培養(yǎng)和移植提供細胞來源.

骨髓間充質(zhì)干細胞在一定條件下可分化成為多種結締組織細胞,也可分化成神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞.目的:觀察采用免疫磁珠法分離成人骨髓來源神經(jīng)干細胞的生物學特征.設計,時間及地點:以患者自身骨髓組織為觀察對象的實驗,于2003-03/2007-06在菏澤市立醫(yī)院檢驗科完成.材料:骨髓組織來自菏澤市立醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的中風,老年性癡呆,帕金森病,腦缺血等神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者.方法:利用免疫磁珠表面的特異性抗體與骨髓組織中神經(jīng)干細胞抗原相結合,在磁場作用下使結合磁珠與其他細胞分離,從而獲得神經(jīng)干細胞,再將所分離的純化神經(jīng)干細胞接種到含體積分數(shù)為0.20胎牛血清的EaglesMEM培養(yǎng)液,再在培養(yǎng)基中加入堿性成纖維因子和表皮生長因子進行原代培養(yǎng).主要觀察指標:采用免疫組織化學染色與免疫熒光染色鑒定細胞,并采用流式細胞術測定細胞DNA含量.結果:在相差顯微鏡下觀察培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞,細胞形態(tài)豐滿,胞核及核仁清晰可見,神經(jīng)突起粗大,網(wǎng)絡稠密.免疫組織化學和免疫熒光染色顯示,細胞神經(jīng)元特異性烯醇化酶,神經(jīng)蛋白,膠質(zhì)纖維酸性蛋白酶,微管相關蛋白為陽性.傳代后的細胞用流式細胞術測定DNA含量為正常二倍體,無誘發(fā)突變.應用免疫磁珠分離法純化弓形蟲速殖子的研究。

免疫共沉淀（COIP）實驗過程
（1）轉染后24-48 h 可收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C， 最大轉速離心30 min后取上清；
（2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；
（3）取10μl protein A 瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3 次，每次3,000 rpm離心3 min；
（4）將預處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與protein A瓊脂糖珠耦聯(lián)；
（5）免疫沉淀反應后，在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次；***加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；
（6）SDS-PAGE, Western blotting或質(zhì)譜儀分析。
注意的問題：
（1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。
（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。
（3）使用對照抗體：

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應用免疫磁珠法分離篩選人乳牙牙髓干細胞,并做培養(yǎng)鑒定.方法采用STRO-1為標記物以免疫磁珠分離篩選人乳牙牙髓干細胞,觀察細胞形態(tài)及生長情況,流式細胞儀檢測細胞表型,并檢測細胞體外多向分化能力.結果應用免疫磁珠法篩選人乳牙牙髓細胞可獲得乳牙牙髓干細胞,經(jīng)統(tǒng)計學處理證明看其生長速度慢于牙髓細胞,細胞表型分析證實CD29,CD105高表達,CD34,CD45低表達.礦化誘導和成脂誘導證實STRO-1+乳牙牙髓細胞具有干細胞多向分化的能力.結論免疫磁珠法是有效的分離純化人乳牙牙髓干細胞的方法.所分離的細胞具有干細胞的表型特點及多向分化能力.天津anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起

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